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馬鈴薯α-淀粉酶在畢赤酵母中的表達、純化及其酶學性質的研究

日期:2018-03-18     瀏覽:981    下載:20     體積:742.49K     評論:0    
 
王水剛‘馬燕林‘馬建忠‘**馬雪青2任海偉‘
1蘭州理工大學生命科學與工程學院蘭州730050
2中國農業科學院蘭州獸醫研究所家畜疫病病原生物學國家重點試驗室國家口蹄疫參考試驗室蘭州730046)
摘要
采用RT-PC R法擴增馬鈴薯夏波蒂的。一淀粉酶成熟膚基因,將其亞克隆至畢赤酵母表達載
體pPIC9k上,Sac II線性化重組表達載體,電擊轉化畢赤酵母GS115感受態細胞,構建重組酵母
GS 115 /pPIC9 k-amy,利用錐蟲藍法篩選獲得高活性轉化子(GSamyAS),以終濃度為0. 5%甲醇誘
導該重組菌表達。一淀粉酶,通過Niz' -NTA agarose親和層析純化,并對其酶學性質進行研究。結
果表明:該酶的最適反應溫度為450C , 40 } 500C酶活較穩定,保溫50 min,殘留相對活力達
92.6%;最適反應pH值為6. 0,并在pH 6. 0 } 7. 0范圍內酶活保持穩定。Caz' , K+可促進酶反
應,以Caz'影響為最,相對酶活力提高到125 % ; Cuz' , Fez' , Fe3' , Znz+對該酶有顯著抑制作用;
Mnz',   Mgz+對酶有微弱抑制作用,Li' , Na+對酶活影響不大。
關鍵詞α-淀粉酶 馬鈴薯 畢赤酵母 表達與純化 酶學性質
 
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