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羧基磁珠

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品牌: PuriMag
單價: 300.00元/ml
起訂: 5 ml
供貨總量: 1000 ml
發貨期限: 自買家付款之日起 3 天內發貨
所在地: 福建 廈門市
有效期至: 長期有效
最后更新: 2019-09-21 15:51
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公司基本資料信息

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詳細說明
 一、概述

PuriMag G-COOH磁珠提供永久結合和固定各種含胺基配體。 珠子表面上的高密度羧酸基團(COOH)可用于配體如蛋白質、肽和核酸的共價偶聯。 用EDC活化珠表面上的羧基,使配體通過伯胺基與磁珠偶聯,形成穩定的酰胺鍵。 PuriMag G-COOH是均勻的聚苯乙烯基超順磁珠,適用于各種磁性分離應用,包括親和力富集、蛋白質純化、免疫沉淀和細胞分選。

 

二、產品特性

1.  PuriMag GS-COOH短鏈羧基磁珠

基團密度> 600 umoles carboxylic acid/g beads

 

2.  PuriMag GL-COOH長鏈羧基磁珠

基團密度> 300 μmoles carboxylic acid/g beads

形態:超順磁球形

直徑:200nm

儲存:10 mg/mL ,去離子水中 2~8 °C保存,勿凍結。

常溫運輸,正確使用保存期一年。

 

三、緩沖液

Coupling Buffer(偶聯緩沖液):

50 mM MES [2-(N-morpholino)-ethanesulfonic acid], pH 6.0, 0.01% Triton X-100;

Coupling Agent(偶聯試劑):

EDC [1-ethyl-3-(3-dimethyaminopropyl)-carbodiimide];

Sulfo-NHS [N-hydroxysulfosuccinimide] (Optional)

Quench Buffer(淬滅緩沖液):

TBS (25 mM Tris-Cl, 130 mM NaCl, 2.7 mM KCl), pH 8, 0.01% Triton X-100;

Storage Buffer(儲存緩沖液):

TBS or PBS containing 0.01% Triton X-100 or 0.01% Tween 20. Add preservative if needed.

 

四、PuriMag G-COOH的使用

以下方案為配體與100μL的PuriMag G-COOH羧基磁珠的偶聯方案。該方案可按需放大或縮小。強烈建議對珠子活化(EDC、EDC / NHS和pH)和偶聯條件(配體濃度、偶聯緩沖液、pH、反應體積和溫育時間)進行優化。

注意:

■ 通過渦旋確保磁珠均勻懸浮。

■ 為獲得最佳性能,在無胺偶聯緩沖液中偶聯,蛋白應為0.5?4mg / mL,寡核苷酸為20?100μM,不含其它蛋白。較高濃度的蛋白可靈活地優化反應體積。含tris、甘氨酸、醋酸鹽或檸檬酸鹽的緩沖液不能使用。

■ 含有0.01%的Triton X-100的50 mM MES緩沖液(pH 6.0)可用作活化和偶聯緩沖液。當使用化學合成的寡核苷酸時,寡核苷酸末端應有5'-胺基以偶聯磁珠。

■ 珠子含有0.5%SDS以穩定懸浮液。盡管非必須,但在所有緩沖液中包含0.01?0.05%Triton X-100或0.01?0.05%吐溫20將防止珠粒凝結并改善分散特性。

偶聯方案A:使用EDC的兩步偶聯

該方案被推薦用于將蛋白偶聯到羧基磁珠上。首先使用水溶性碳二亞胺(EDC)活化珠上的羧基以形成胺反應性中間體。除去EDC后,加入蛋白質配體并通過蛋白質上的伯胺與磁珠的活化羧基偶聯。

1. 確保蛋白或配體在無胺偶聯緩沖液中。100μL偶聯緩沖液中需50?400μg蛋白用于耦合。放在冰上。

2. 渦旋振蕩重懸PuriMag G-COOH羧基磁珠。吸取100μL磁珠到1.5mL EP管中,磁分離并吸棄上清。

3. 加入200μL偶聯緩沖液,渦旋20秒洗滌磁珠,磁分離并吸棄上清。

4. 按步驟3再次清洗羧基磁珠兩次。

5. 使用前用偶聯緩沖液中配制EDC(50 mg / mL)。

6. 向磁珠中加入80μL偶聯緩沖液和20μL新配的EDC溶液,混勻。室溫孵育15分鐘,磁分離并吸棄上清。

7. 用200μL偶聯緩沖液清洗磁珠,渦旋混勻,磁分離并吸棄上清。

注意:該步驟應該快速進行,因為磁珠上的胺反應性中間體不穩定。

8. 向羧基磁珠加入100μL偶聯緩沖液和50?400μg蛋白質或配體,渦旋混勻。

9. 室溫下孵育30分鐘。根據配體和濃度的不同,最佳孵育時間可能為0.5?4小時。

10. 將試管放入磁力架中,磁分離并吸棄上清。該上清液含有未結合的配體,如果優化方案可保存用于分析。

11. 向羧基磁珠加入500μL淬滅緩沖液。渦旋20秒,磁分離并吸棄上清。

12. 向羧基磁珠加入500μL淬滅緩沖液。室溫孵育30?60分鐘。磁分離并吸棄上清。

13. 向羧基磁珠加入500μL淬滅緩沖液。劇烈漩渦20秒,磁分離并吸棄上清。按該步驟再洗兩次磁珠。

14. 從磁力架上取下EP管。添加100μL存儲緩沖液。渦旋混合并在2?8°C儲存偶聯好的磁珠。

偶聯方案B:用sulfo-NHS替代兩步偶聯

該方案與上述方案類似,但使用NHS。可通過加入穩定胺反應性中間體的sulfo-NHS來增加EDC介導的反應的效率。

1. 確保蛋白或配體在無胺偶聯緩沖液中。100μL偶聯緩沖液中需50?400μg蛋白用于耦合。放在冰上。

2. 渦旋振蕩重懸PuriMag G-COOH羧基磁珠。吸取100μL磁珠到1.5mL的EP管中,磁分離并吸棄上清。

3. 加入200μL偶聯緩沖液。劇烈漩渦20秒,磁分離并吸棄上清。

4. 按步驟3再清洗羧基磁珠兩次。

5. 使用前用偶聯緩沖液中配制EDC(50 mg / mL)。在使用前用偶聯緩沖液配制Sulfo-NHS(50mg / mL)。

6. 向磁珠中加入60μL偶聯緩沖液、20μL新配的EDC溶液和20μL新配的Sulfo-NHS溶液。渦旋混勻。

7. 室溫下混勻孵育15分鐘。磁分離并吸棄上清。

8. 用200μL偶聯緩沖液清洗磁珠。渦旋混勻,磁分離并吸棄上清。

9. 加入100μL偶聯緩沖液和50?400μg蛋白或配體。渦旋混勻。在室溫下連續混合孵育0.5?4小時。

10. 將試管放入磁力架中,磁分離并吸棄上清。該上清液含未結合的配體,如果優化方案可保存用于分析。

11. 向羧基磁珠加入500μL淬滅緩沖液。渦旋20秒,磁分離并吸棄上清。

12. 向羧基磁珠加入500μL淬滅緩沖液。室溫孵育30?60分鐘。磁分離并吸棄上清。

13. 向羧基磁珠加入500μL淬滅緩沖液。劇烈漩渦20秒,磁分離并吸棄上清。按該步驟再洗兩次磁珠。

14. 從磁力架上取下EP管。添加100μL存儲緩沖液。渦旋混合并在2?8°C儲存偶聯好的磁珠。

偶聯方案C:一步偶聯

這是一個快速結合方案,在一個反應中同時加入羧基磁珠、EDC和配體。該方案最適合偶聯寡核苷酸和小分子,當配體上的羧酸基團的激活不會影響后續實驗時。

1. 確保蛋白或配體在無胺偶聯緩沖液中。100μL偶聯緩沖液中需50?400μg蛋白或1?5nmol寡核苷酸進行偶聯。放在冰上。

2. 渦旋振蕩重懸PuriMag G-COOH羧基磁珠。吸取100μL磁珠到1.5mL的EP管中,磁分離并吸棄上清。

3. 加入200μL偶聯緩沖液。劇烈漩渦20秒,磁分離并吸棄上清。

4. 按步驟3再清洗羧基磁珠兩次。

5. 從磁力架上取下EP管。在80μL偶聯緩沖液中加入50?400μg配體。

6. 在室溫下孵育30分鐘。

7. 使用前用偶聯緩沖液配制EDC(50 mg / mL)。

8. 將20μL新配的EDC溶液加入磁珠中。渦旋混勻,室溫下連續混合孵育0.5?4小時。

9. 將試管放入磁力架中,磁分離并吸棄上清。該上清含未結合的配體,如果優化方案可以保存用于分析。

10. 向羧基磁珠加入500μL淬滅緩沖液。渦旋20秒,磁分離并吸棄上清。

11. 向羧基磁珠加入500μL淬滅緩沖液。室溫孵育30?60分鐘。磁分離并吸棄上清。

12. 向羧基磁珠加入500μL淬滅緩沖液。劇烈漩渦20秒,磁分離并吸棄上清。按該步驟再洗兩次磁珠。

13. 從磁力架上取下EP管。添加100μL存儲緩沖液。渦旋混合并在2?8°C儲存偶聯好的磁珠。

 

更多其它羧基磁珠請參考:

羧基瓊脂糖磁珠 http://www.purimagbead.com/Product/6397142410.html

羧基二氧化硅磁珠 http://www.purimagbead.com/Product/3076912849.html

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